One Step Fast qRT PCR-sæt, qScript™

Disse sæt tilbyder en praktisk og højfølsom opløsning til real-time revers transkriptase PCR (qRT-PCR) af RNA-skabeloner vha. hybridiseringsprobe-detektionskemikalier, som fx TaqMan® 5'-hydrolyseprober.

Systemet giver mulighed for at udføre cDNA-syntese og PCR-amplifikation i det samme rør. Det er ideelt til højfølsom kvantificering af RNA-vira eller RNA-mål med lav koncentration, såvel som til genekspressionsundersøgelser med højt gennemløb. Det er også optimeret til at levere maksimal RT-PCR-effektivitet, følsomhed og specificitet i formindskede reaktionsvolumener og hurtige cyclingtider.

One Step Fast master mixes leveres som en 4X koncentreret opløsning for at muliggøre tilsætning af større mængder RNA-skabelon og forbedre detektionsfølsomheden for prøver med lave koncentrationer. Denne enestående formulering maksimerer både revers transkriptases og Taq DNA-polymerases aktiviteter, samtidig med at risikoen for primer-dimer og andre uspecifikke PCR artefakter reduceres. Dette muliggør ikke-kompromitteret co-amplifikation af transkripts med et lavt antal kopier ved tilstedeværelse af referencegener med et højere antal kopier i fordoblede qRT-PCR-applikationer.

Højspecifik amplifikation er afgørende for at opnå succesrig qRT-PCR, da uspecifikke produkter kan konkurrere om amplifikation af målsekvensen og forringe PCR-effektiviteten. Et nøglekomponent i disse sæt er AccuStart™ Taq DNA- polymerase med monoklonale antistoffer, som binder til polymerasen og bevarer den inaktiv under reaktionsopsætningen og trinnet med revers transskription ved 50 °C. Et kort 30-sekunders varmeaktiveringstrin ved 95 °C denaturerer antistofferne irreversibelt, hvorved der frigøres komplet aktivt og umodificeret Taq DNA-polymerase. Hurtig genindvinding af komplet aktiv, umodificeret Taq DNA-polymerase er afgørende for effektiv forlængelseskinetik. Derfor giver disse sæt større reagensøkonomi og højere gennemløb i laboratoriet i enten konventionelle qPCR-systemer eller systemer med høje stigningsrater.

Bestillingsoplysninger: Sæt fås til alle realtids-PCR-instrumentplatforme, herunder de som kræver normalisering med ROX referencefarve.