Les kits de test fluorométrique HTS caspase-3 et caspase-8 fournissent un système de test homogène pour la détection rapide et extrêmement sensible de l’activité de la caspase-3 ou de la caspase-8 par fluorescence dans des cellules de réaction enzymatique ou de mammifère.

• Test homogène en une étape spécifiquement conçu pour la détection basée sur HTS
• Cinétique enzymatique rapide
• Lecture fluorescente verte sensible

Le kit de test fluorométrique HTS caspase-3 DEVD-R110 comprend le substrat fluorogène (Ac-DEVD)2-R110, qui contient deux tétrapeptides DEVD et est complètement hydrolysé par l’enzyme en deux étapes successives. Le clivage du premier peptide DEVD aboutit à l’intermédiaire monopeptide Ac-DEVD-R110, dont les longueurs d’onde d’absorption et d’émission sont similaires à celles de R110 (λEx / λEm = 496/520 nm) mais dont la fluorescence n’équivaut qu’à environ 10 % de celui-ci. L’hydrolyse du second peptide DEVD libère le colorant R110, entraînant une augmentation substantielle de la fluorescence.

Le kit de test fluorométrique HTS caspase-3 comprend Ac-DEVD-CHO, un inhibiteur de la caspase-3 qui peut être utilisé comme contrôle négatif. En outre, R110 est fourni dans le kit pour générer une courbe standard, qui peut être utilisée pour quantifier l’activité de la caspase-3. Un tampon de lyse cellulaire / test d’un ml est suffisant pour 10 tests au format 96 puits.

Le kit de test fluorométrique HTS caspase-8 IETD-R110 comprend le substrat fluorogène (Ac-IETD)2-R110, qui contient deux tétrapeptides IETD et est complètement hydrolysé par l’enzyme en deux étapes successives. Le clivage du premier peptide IETD aboutit à l’intermédiaire monopeptide Ac-IETD-R110, dont les longueurs d’onde d’absorption et d’émission sont similaires à celles de R110 (λEx / λEm = 496/520 nm) mais dont la fluorescence n’équivaut qu’à environ 10 % de celui-ci. L’hydrolyse du second peptide IETD libère le colorant R110, entraînant une augmentation substantielle de la fluorescence.

Le kit de test fluorométrique HTS caspase-8 comprend Ac-IETD-CHO, un inhibiteur de la caspase-8 qui peut être utilisé comme contrôle négatif. En outre, R110 est fourni dans le kit pour générer une courbe standard, qui peut être utilisée pour quantifier l’activité de la caspase-8.

Remarque : bien que la caspase-8 coupe préférentiellement la séquence consensus IETD par rapport à d’autres séquences de substrat, d’autres caspases telles que la caspase-3 peuvent également cliver efficacement l’IETD. Le chevauchement de la reconnaissance du substrat de la caspase limite l’utilité des peptides du substrat de la caspase pour distinguer les différentes activités de la caspase dans les lysats cellulaires.