Diese Kits bieten eine praktische und hochempfindliche Lösung für reverse Transkriptase-PCR (qRT-PCR) der RNA-Templates in Echtzeit unter Verwendung der Hybridisierungssonden für chemische Nachweisverfahren wie TaqMan® 5'-Hydrolyse-Proben.

Das System ermöglicht eine cDNA Synthese und PCR-Amplifikation, die im selben Röhrchen ohne Öffnen zwischen den Prozessen ausgeführt werden kann. Es ist ideal für die hochempfindliche Quantifizierung von RNA-Viren oder für RNA-Ziele in geringer Konzentration sowie für Studien zur Genexpression mit hohem Durchsatz. Es ist auch dafür optimiert worden, eine maximale RT-PCR-Effizienz, Empfindlichkeit und Spezifität in reduzierten Reaktionsvolumina und schnellen Zykluszeiten zu liefern.

OneStep Fast MasterMixes sind mit einer 4X konzentrierten Lösung ausgestattet, um eine Zugabe von höheren Mengen an RNA-Templates und verbesserter Nachweisempfindlichkeit bei Proben mit niedriger Konzentration zu ermöglichen. Die einzigartige Formel maximiert die Aktivitäten beider reverser Transkriptasen und der Taq DNA-Polymerase, während sie das Potential für Primerdimer und andere nicht spezifische PCR-Artefakte minimiert. Dies ermöglicht die eindeutige Koamplifikation von Transkripten mit wenigen Exemplaren in verdoppelten qRT-PCR-Anwendungen.

Eine hochspezifische Amplifikation ist entscheidend für eine erfolgreiche qRT-PCR, da nicht-spezifische Produkte mit der Amplifikation der Zielsequenz konkurrieren und die Effizienz der PCR beeinträchtigen. Eine Schlüsselkomponente dieser Sets ist die AccuStart™ Taq DNA-Polymerase mit monoklonalen Antikörpern, die die Polymerase binden und während des Reaktionsaufbaus und des Programmschritts für Reverse Transkription bei 50 °C inaktiv halten. Nach einem kurzen Aktivierungsschritt unter Wärmeeinwirkung während 30 Sekunden bei 95 °C denaturieren die Antikörper irreversibel und setzen vollständig aktive, unveränderte Taq DNA-Polymerase frei. Die schnelle Wiederherstellung der vollständig aktiven, unveränderten Taq DNA-Polymerase ist entscheidend für eine effiziente Extensionskinetik. Aus diesem Grund liefern diese Kits eine bessere Reagenzienökonomie und Labor-Durchsatz bei einer konventionellen oder schnellen Heizrate des qPCR-Systems.