Cas9-Nuklease (4 μg/μl) zur Erzeugung von Doppelstrangbrüchen bei der CRISPR-Cas9-Genomeditierung.

ArciTect™ Cas9-Nuklease erfordert die Verbindung mit einer Leit-RNA – z. B. ArciTect™ sgRNA (Katalog #STMC200-0013) oder einem Duplex aus ArciTect™ tracrRNA (Katalog #STMC76016) und ArciTect™ crRNA (Katalog #STMC76010) – um einen Ribonukleoproteinkomplex (RNP) zu bilden. Dieser RNP-Komplex erzeugt dann Doppelstrangbrüche an ortsspezifischen Stellen im Genom. ArciTect™ Cas9 Nuclease enthält ein Kernlokalisierungssignal am N-Terminus, das sicherstellt, dass der RNP-Komplex in den Zellkern transloziert wird, wodurch die Effizienz der Genombearbeitung erhöht wird. Da der RNP-Komplex nach der Transfektion voll funktionsfähig ist, ermöglicht er eine sofortige Aktivität nach der Translokation in den Zellkern. Der RNP-Komplex wird über 48 Stunden abgebaut, sodass ausreichend Zeit für die Genombearbeitung bleibt und gleichzeitig unerwünschte Effekte reduziert werden, die durch die kontinuierliche Anwesenheit des RNP-Komplexes verursacht werden können. Durch die Verwendung des RNP-Systems wird außerdem der mühsame Prozess der Erzeugung stabiler Cas9-exprimierender Zelllinien umgangen, was Zeit spart und das Risiko von Off-Target-Effekten aufgrund undichter induzierbarer Expressionssysteme verringert. Das S. pyogenes Cas9 verwendet die Protospacer-Adjacent-Motiv-Sequenz (PAM) NGG (wobei N ein beliebiges Nukleotid sein kann). Das Enzym spaltet nicht ohne eine genomische PAM-Stelle stromabwärts der Zielsequenz.